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ONE-Glo™ +Tox Assay (ONE-Glo™ +Tox 检测试剂盒 ) 将萤光检测方法与细胞活力标记物结合起来，从而在细胞健康的环境下，更好地理解报告基因的表达情况。 该试剂盒采用两步法，只需加入试剂，就可在同一平板的单一检测孔内进行这些检测，而无需进行平行检测。该检测法的第一部分是利用 CellTiter-Fluor™ 细胞活力检测试剂盒 (CellTiter-Fluor™ Cell Viability Assay) 进行的非裂解性荧光检测，用于检测实验处理后细胞群落中活细胞的相对数量。 CellTiter_x0002_Fluor™ 细胞活力检测试剂盒检测的是活细胞蛋白酶的活性，该蛋白酶为保守的组成性表达蛋白，因而可以作为细胞活力的标志物。 活细胞蛋白酶活性仅存在于完好的活细胞内，是通过一种可产生荧光并可穿透细胞的多肽底物 (glycylphenylalanyl-aminofluorocoumarin，GF_x0002_AFC) 来检测的。该底物进入完整的细胞后，被活细胞蛋白酶切割，产生荧光信号，该信号的强度与活细胞数量相关 ( 图 1)。当细胞膜的完整性丧失并渗漏到周围培养基中后，该活细胞蛋白酶即失活。自由的 AFC 荧光基团可用微孔板酶标仪或 CCD 成像仪来检测，激发光波长为 380–400nm ，发射光波长为 505nm。该试剂盒的第二部分是利用 ONE-Glo™ 萤光素酶检测系统(ONE-Glo™ Luciferase Assay System) 定量萤火虫萤光素酶报告基因在所转入细胞内的表达 ( 图 2)。
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